电泳(Electrophoresis)
字数 1329 2025-12-10 06:59:23
电泳(Electrophoresis)
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基础定义与物理图像
- 核心概念:电泳是指分散在溶液或悬浮液中的带电粒子(如离子、分子、胶体颗粒、细胞器等),在施加于两端的外加直流电场作用下,向与其自身所带电荷电性相反的电极方向发生定向迁移的现象。其本质是电场力对带电粒子的直接驱动。
- 关键参数:粒子的迁移速度(v)取决于其本身的性质(电荷量 q)以及所处环境的性质(电场强度 E、介质黏度 η)。最简单的关系由公式 v = μE 描述,其中 μ 称为电泳迁移率,是电泳分析中的核心特征量。
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迁移率的决定因素:Hückel 方程
- 对于理想化的孤立球形粒子(尺寸远小于其双电层厚度),在无限稀释的电解质溶液中,其电泳迁移率 μ 可以用 Hückel 方程 描述:μ = q / (6πηr),其中 q 是粒子净电荷,r 是流体力学半径(包括溶剂化层),η 是介质黏度。
- 物理意义:该方程表明,粒子的迁移速度与其净电荷成正比,与其尺寸(半径)和介质黏度成反比。电荷越大、尺寸越小,粒子迁移越快。这是理解电泳分离的基石。
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复杂情况:双电层的影响与 Smoluchowski 方程
- 问题引入:在大多数实际体系中(如含有一定电解质浓度的溶液),带电粒子周围会形成双电层(由紧密层和扩散层组成)。当粒子在外电场中运动时,双电层中的反离子会运动,带动周围流体运动,从而影响粒子迁移。
- Smoluchowski 方程:对于相对较大的非导电粒子(粒子半径远大于双电层厚度),且表面为光滑平面时,迁移率公式演变为:μ = εζ / (4πη),其中 ε 是介质的介电常数,ζ 是Zeta 电势。
- Zeta 电势的意义:Zeta 电势是滑动面(粒子与流体发生相对运动的界面)处的电势,它比表面电势更易测量,是表征粒子在电场中运动行为的关键物理量。此方程表明,此时迁移率与粒子尺寸和形状无关,仅取决于 Zeta 电势和介质性质。
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从物理现象到分析技术:电泳分离
- 分离原理:利用混合物中不同组分因电荷量、大小、形状等差异导致其电泳迁移率不同,从而在电场中“赛跑”的速度不同。经过一段时间后,各组分在介质(如凝胶、毛细管)中迁移的距离不同,实现空间上的分离。
- 主要形式:
- 凝胶电泳(如琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳):凝胶作为支持介质,具有分子筛效应,能根据分子大小进行更精细的分离。广泛用于核酸(DNA/RNA)和蛋白质的分析。
- 毛细管电泳:在极细的毛细管中进行,分离效率高、速度快、样品用量少。其分离机理综合了电泳迁移和电渗流。
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重要变体与应用拓展
- 等电聚焦:在具有 pH 梯度的介质中进行。带电蛋白质会在电场中迁移至其净电荷为零的 pH 位置(即等电点 pI)并聚焦成锐利的区带,用于高分辨率分离和 pI 测定。
- 双向电泳:结合了基于等电点(第一向)和基于分子量(第二向)的两次垂直方向的电泳,是蛋白质组学中分离复杂蛋白质混合物的关键技术。
- 电泳沉积:利用电泳现象,使带电粒子(如陶瓷颗粒、聚合物胶体)在电极表面沉积形成均匀涂层或薄膜的材料制备技术。
- 微流控芯片电泳:将电泳集成到微流控芯片上,实现快速、高通量、自动化的生化分析。